Иммуногистологический анализ срезов тканей и цитоспинов (иммуногистохимия, иммуноцитохимия, многоцветная иммунофлюоресценция) с количественным анализом белковой экспрессии

Подать заявку на исследование

Требования к образцам: образцы животного происхождения (человек); парафиновые блоки с тканью (FFPE блоки) или цитоблоки – транспортировка при комнатной температуре; срезы FFPE тканей на стекле с адгезионным покрытием - транспортировка при комнатной температуре в специальном боксе для стекол; суспензия клеток – жизнеспособность не менее 98%, транспортировка на льду до 4 часов.

• Иммуногистохимический анализ парафиновых срезов тканей с последующей визуализацией на световом микроскопе “Axio Imager 2” Carl Zeiss;
• Иммунофлюоресценция на парафиновых срезах тканей или клетках с последующей конфокальной микроскопией (Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп ZEISS LSM 780 NLO);
• Приготовление цитоспинов (из клеток) с помощью цитологической центрифуги BKC-TL4Cyto (Biobase, Китай) с фиксацией клеток и с последующей иммунологической окраской на стекле;
• Количественный анализ белковой экспрессии одного или нескольких маркеров в ткани или на клетках при помощи специального ПО.

Иммуногистологические методы основаны на принципе взаимодействия антигенов с антителами. Иммуногистохимический анализ (ИГХ) широко применяется в диагностике заболеваний (онкология, аутоиммунные заболевания, инфекционные болезни), в фундаментальных исследованиях (клеточная биология, молекулярная биология, генетика).

Лаборатория предлагает услуги по ручному окрашиванию парафиновых срезов или цитоспинов с помощью ИГХ или многоцветной иммунофлюоресценции (до 4 белков на срезе). Лаборатория полностью оснащена для проведения такого рода исследований: микротом ротационный автоматический (RWD Life Science, Китай), водяная баня (Biosan, Россия), штативы и емкости для окрашивания, шкаф вытяжной Политэн, световой микроскоп “Axio Imager 2” Carl Zeiss, Германия), конфокальный микроскоп LSM 780 NLO (Carl Zeiss, Германия), буферы.

Визуализация результатов ИГХ осуществляется с помощью световой микроскопии (Микроскоп биологический для лабораторных исследований “Axio Imager 2” Carl Zeiss). Визуализация результатов многоцветного иммунофлюоресцентного окрашивания проводится с помощью конфокальной микроскопии (Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп ZEISS LSM 780 NLO).

Подсчет белковой экспрессии (как результат ИГХ или многоцветной иммунофлюоресценции) осуществляется с помощью специального программного обеспечения. Программное обеспечение QuPath используется для анализа и количественной оценки экспрессии маркеров. Отдельные области опухоли выбираются и анализируются с использованием обнаружения клеток и классификации интенсивности клеток. Параметр «Клетка: среднее значение OD DAB» используется для анализа как мембранного, так и цитоплазматического окрашивания селективного антитела. Пороги интенсивности устанавливаются для дальнейшей подклассификации клеток как отрицательных, слабых, умеренных или сильно положительных для окрашивания маркеров на основе средней оптической плотности ядерных DAB. Результаты анализа представляются параметром H-score и процентом позитивных клеток, которые автоматически рассчитываются программой Qupath для каждого среза ткани.

Оборудование